Cyp4f15 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-430669-ACT

Cyp4f15 kodiert eine murine Monooxygenase der Cytochrom‑P450‑4F‑Familie, die den oxidativen Stoffwechsel endogener Lipide katalysiert, einschließlich der Hydroxylierung von Fettsäuren und Eicosanoiden, die inflammatorische Signalwege und die Lipidhomöostase mitprägen. Als ER‑assoziiertes Enzym trägt Cyp4f15 zu Netzwerken der Xenobiotika‑ und Lipidbiotransformation bei, die mit dem Redoxgleichgewicht, dem Remodeling von Membranlipiden und nachgeschalteten immunmodulatorischen Signalwegen verknüpft sind. Eine veränderte Regulation der CYP4F‑vermittelten Oxidation kann Gewebereaktionen auf metabolischen Stress und inflammatorische Reize beeinflussen, was Cyp4f15 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung des Umsatzes von Lipidmediatoren in Leber‑ und immunrelevanten Kontexten macht. Diese Prozesse werden häufig in Modellen metabolischer Dysregulation und entzündungsassoziierter Phänotypen untersucht, ohne dass damit therapeutische Wirkungen impliziert werden.

Cyp4f15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cyp4f15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cyp4f15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cyp4f15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cyp4f15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cyp4f15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cyp4f15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cyp4f15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cyp4f15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cyp4f15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.