CYP2E1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419917-LAC

Il gene murino **Cyp2e1** codifica **CYP2E1**, un enzima microsomiale del citocromo P450 che catalizza l’ossidazione di piccole molecole e di substrati endogeni nei tessuti epatici ed extraepatici. L’attività di CYP2E1 è strettamente legata al trasferimento di elettroni dipendente da NADPH e può aumentare le specie reattive dell’ossigeno, collegando questo enzima allo stress ossidativo, alla perossidazione lipidica e all’omeostasi redox cellulare. Attraverso interazioni con il metabolismo degli xenobiotici, l’ossidazione degli acidi grassi e la segnalazione infiammatoria, l’alterata espressione di CYP2E1 viene frequentemente analizzata in modelli di steatosi, danno epatico indotto da sostanze tossiche, insulino-resistenza e neuroinfiammazione. In quanto regolatore della bioattivazione metabolica e delle risposte allo stress, **Cyp2e1** è ampiamente studiato per il suo impatto sulla funzione mitocondriale, sullo stress del reticolo endoplasmatico (RE) e sui programmi trascrizionali che determinano la suscettibilità dei tessuti al danno.

Le particelle di attivazione lentivirale CYP2E1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cyp2e1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CYP2E1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp2e1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CYP2E1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cyp2e1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.