Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP26B1 (h): sc-403610

Présentation

CYP26B1 code une hydroxylase de l’acide rétinoïque de type cytochrome P450, qui catalyse le catabolisme oxydatif de l’acide tout‑trans rétinoïque et de rétinoïdes apparentés, contrôlant ainsi les gradients intracellulaires de rétinoïdes. En modulant la disponibilité de l’acide rétinoïque, CYP26B1 influence des programmes transcriptionnels dépendants des récepteurs de l’AR (RAR/RXR) qui régulent la différenciation, la morphogenèse et l’homéostasie tissulaire. Son activité s’inscrit à l’interface des réseaux de signalisation du développement et des décisions de destin cellulaire via le métabolisme des rétinoïdes et les voies de régulation génique en aval. Une expression ou une fonction dérégulée de CYP26B1 a été impliquée dans des phénotypes congénitaux du développement et dans des contextes de signalisation des rétinoïdes altérée pertinents pour la biologie du cancer et les processus inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de l’homéostasie des rétinoïdes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP26B1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYP26B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYP26B1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYP26B1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP26B1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYP26B1 pour l'étude de la signalisation de CYP26B1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYP26B1 essentiels à la fonction de CYP26B1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYP26B1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP26B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYP26B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYP26B1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP26B1 plasmide HDR (h) et le CYP26B1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYP26B1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYP26B1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.