Particules Lentivirales d'Activation (h) CYP21A2: sc-402919-LAC

CYP21A2 code la 21‑hydroxylase du cytochrome P450, une monooxygénase associée au réticulum endoplasmique qui catalyse des étapes clés de 21‑hydroxylation dans la stéroïdogenèse surrénalienne, notamment la conversion de la progestérone et de la 17α‑hydroxyprogestérone vers la biosynthèse des minéralocorticoïdes et des glucocorticoïdes. Cette enzyme fonctionne via la chimie rédox P450 dépendante de l’hème et s’intègre aux voies hormonales dérivées du cholestérol qui façonnent la zonation surrénalienne, les boucles de rétrocontrôle endocrinien et l’état métabolique cellulaire. Une activité altérée de CYP21A2 est fortement associée aux phénotypes d’hyperplasie congénitale des surrénales et constitue un point d’entrée moléculaire pour étudier l’accumulation de précurseurs stéroïdiens, la perturbation de la production de cortisol/aldostérone et les effets de signalisation en aval dans des modèles cellulaires pertinents. Comme CYP21A2 se situe dans une région génomique complexe, à proximité du pseudogène hautement homologue CYP21A1P, l’analyse précise de la régulation spécifique du locus est souvent importante pour les études mécanistiques.

Les particules d'activation lentivirales CYP21A2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CYP21A2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYP21A2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CYP21A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYP21A2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CYP21A2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.