CTP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417472

Übersicht

SLC25A1 kodiert das mitochondriale Citrat-Transporterprotein (CTP), einen Carrier der inneren Membran, der Citrat/Isocitrat gegen Malat austauscht und den mitochondrialen Stoffwechsel mit zytosolischen Biosyntheseprogrammen verbindet. Durch den Export von Citrat zur ATP-Citrat-Lyase‑abhängigen Acetyl‑CoA‑Produktion unterstützt CTP die de‑novo‑Lipidsynthese, die Proteinacetylierung und epigenetische Regulation und beeinflusst zugleich das Redoxgleichgewicht über nachgeschaltete NADPH‑bildende Signalwege. Die Aktivität von SLC25A1 ist in den zentralen Kohlenstoffstoffwechsel eingebettet, einschließlich Citratzyklus (TCA‑Zyklus), Glykolyse und anaplerotischem Fluss, und prägt die zellulären Antworten auf Nährstoffverfügbarkeit und mitochondrialen Stress. Eine Fehlregulation des Citrattransports wurde mit verändertem metabolischem Remodeling in Krebs, neuroentwicklungsbezogenen Erkrankungen und Kontexten inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, was SLC25A1 zu einem hilfreichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur mitochondrien–zytosolischen Kommunikation macht.

Das CTP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC25A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC25A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC25A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CTP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC25A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CTP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC25A1-Exone abzielen, die für die CTP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC25A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CTP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CTP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC25A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CTP HDR-Plasmid (h) und CTP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC25A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC25A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.