Plásmido Doble Nickase (h) CT-R: sc-404578-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CT-R consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CT-R (h) y el plásmido de doble nickasa CT-R (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CALCR. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CT-R Anticuerpo (2F7): sc-293299
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CT-R | sc-404578-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CT-R | sc-404578-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CALCR codifica el receptor humano de calcitonina (CT-R), un receptor acoplado a proteínas G de clase B que se une a la calcitonina y se acopla principalmente a la señalización Gs–adenilil ciclasa para elevar el AMPc, con acoplamiento adicional a la fosfolipasa C y a vías posteriores dependientes de calcio de manera dependiente del contexto. La actividad de CT-R regula la función de los osteoclastos y la remodelación ósea, integrándose con MAPK y otras redes de segundos mensajeros que influyen en la diferenciación celular y la actividad resortiva. El empalme alternativo puede producir isoformas del receptor con propiedades de señalización distintas, lo que contribuye a respuestas específicas de tejido en el hueso y en otros tejidos sensibles a la calcitonina. La desregulación de la señalización de CALCR se ha implicado en trastornos del metabolismo esquelético y en cambios de expresión del receptor observados en múltiples tipos de tumores, lo que respalda su valor como diana mecanística para estudios de vías y estados celulares.
CT-R El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CALCR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CALCR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CALCR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CALCR alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.