CRY1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400946-ACT

Human CRY1 kodiert Cryptochrom, zirkadianer Regulator 1, eine Kernkomponente der molekularen Uhr, die mit PER-Proteinen reprimierende Komplexe bildet, um die von CLOCK:BMAL1 gesteuerte Transkription zu hemmen. Über transkriptionell‑translationale Rückkopplungsschleifen hilft CRY1 dabei, rhythmische Expressionsprogramme zu koordinieren, die den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten, den Stoffwechsel und endokrine Signalwege beeinflussen. Eine dysregulierte CRY1-Aktivität wurde mit einer veränderten zirkadianen Phase und dem Schlaf‑Wach‑Timing in Verbindung gebracht, und zirkadiane Störungen sind häufig mit metabolischen und neuroverhaltensbezogenen Phänotypen assoziiert. In der biomedizinischen Forschung wird CRY1 häufig untersucht, um von der Uhr kontrollierte Gen-Netzwerke sowie tageszeitabhängige Effekte auf die Zellphysiologie zu analysieren.

CRY1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CRY1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CRY1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CRY1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CRY1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CRY1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CRY1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CRY1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CRY1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CRY1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.