CRMP-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404504

Descripción general

DPYSL4 codifica la proteína mediadora de la respuesta a colapsina 3 (CRMP-3), una fosfoproteína citosólica de la familia CRMP que conecta señales de guía extracelulares con la dinámica de los microtúbulos y la remodelación del citoesqueleto. Se ha implicado a CRMP-3 en el crecimiento de neuritas, la guía axonal y la regulación de la morfología celular a través de vías de señalización aguas abajo de las semaforinas y quinasas relacionadas que modulan los estados de fosforilación de CRMP. Más allá del contexto neuronal, la expresión de DPYSL4 se ha asociado con programas de adaptación al estrés y reprogramación metabólica, vinculándola a procesos como la función mitocondrial, la motilidad y la supervivencia celular. Se ha descrito señalización DPYSL4/CRMP-3 desregulada en estudios de trastornos neurológicos y fenotipos asociados al cáncer, lo que respalda su utilidad como diana mecanística para la interrogación de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CRMP-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DPYSL4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DPYSL4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DPYSL4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CRMP-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DPYSL4 para la investigación de la señalización de CRMP-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DPYSL4 críticos para la función de CRMP-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DPYSL4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CRMP-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CRMP-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DPYSL4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CRMP-3 (h) y el plásmido HDR CRMP-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DPYSL4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DPYSL4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.