Plásmido CRISPR de Activación (h) Crk II: sc-402415-ACT

El CRK humano codifica Crk II, una proteína adaptadora con dominios SH2/SH3 que acopla receptores fosforilados en tirosina y proteínas andamiaje a complejos de señalización aguas abajo. Crk II coordina el ensamblaje de vías que controlan la señalización de integrinas, la dinámica de las adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto de actina y la migración celular mediante interacciones con socios como p130CAS/BCAR1, paxilina y módulos DOCK180/RAC1. Estas redes integran señales de receptores tirosina cinasa y de receptores de adhesión para regular la proliferación, la supervivencia y la motilidad direccional. La señalización desregulada de CRK/Crk II se ha implicado en una biología de invasión y metástasis aberrante y en respuestas alteradas a la señalización dependiente de factores de crecimiento y de la adhesión en el cáncer y otros trastornos proliferativos.

Crk II El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CRK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Crk II El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CRK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CRK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Crk II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CRK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Crk II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Crk II en células tumorales con expresión de CRK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.