CREM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400406

Descripción general

CREM (modulador del elemento de respuesta a cAMP) es un factor de transcripción bZIP de la familia CREB/ATF que se une a elementos de respuesta a cAMP para regular programas de expresión génica dependientes de estímulos. Mediante la integración de la señalización cAMP/PKA con entradas vinculadas al calcio y a MAPK, CREM modula resultados transcripcionales que influyen en la proliferación celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. CREM es particularmente importante en la biología endocrina y reproductiva, incluida la regulación de la espermatogénesis y de la expresión génica neuroendocrina, y su actividad específica por isoforma puede alternar entre la activación y la represión transcripcional. La desregulación de la señalización de CREM se ha asociado con estados transcripcionales inmunes e inflamatorios alterados y se ha estudiado en contextos como la disfunción endocrina, mecanismos relacionados con la infertilidad y vías relevantes para enfermedades neuropsiquiátricas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CREM (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CREM en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CREM junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CREM tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CREM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CREM para la investigación de la señalización de CREM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CREM críticos para la función de CREM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CREM para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CREM CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CREM CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CREM. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CREM (h) y el plásmido HDR CREM (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CREM para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CREM definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.