Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
CPS2 CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-403519
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- CPS2 CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在CPS2基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：CPS2: sc-376072，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
CPS2 CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-403519 | 20 µg | $397.00 |
概述
CAD 编码一种多功能的细胞质酶复合体，催化从头嘧啶生物合成途径中最早且具有承诺性的步骤。其中 CPS2（氨甲酰磷酸合成酶2）启动谷氨酰胺与碳酸氢盐向 UMP 生成方向的转化。该活性维持 DNA 复制、RNA 转录以及膜磷脂合成所需的核苷酸库稳态，从而将 CAD 的功能与细胞周期进程和代谢适应联系起来。CAD 受营养与生长信号通路调控，包括 PRPP 的变构调节与 UTP 的反馈抑制，并可在 MAPK/mTOR 信号下游通过磷酸化被调节。嘧啶代谢失衡及 CAD 活性改变与多种疾病背景下观察到的增殖表型和代谢重编程相关，因此 CAD 是研究核苷酸应激反应与基因组维持的一个有价值节点。
CPS2 CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中CAD基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对CAD基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏CAD开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使CPS2蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建CAD缺失的细胞模型，用于CPS2信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 CPS2 功能至关重要的 CAD 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 CAD 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 CPS2 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 CPS2 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 CAD 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 CPS2 HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 CPS2 HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由CAD同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定CAD靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。