Plásmido CRISPR de Activación (h) CPEB4: sc-413379-ACT

El CPEB4 humano (proteína de unión al elemento de poliadenilación citoplasmática 4) es un regulador de unión a ARN que controla la poliadenilación citoplasmática, la estabilidad del ARNm y la traducción mediante el reconocimiento de secuencias CPE en las regiones 3′ UTR. Al coordinar programas de expresión génica posranscripcional, CPEB4 influye en la progresión del ciclo celular, la plasticidad neuronal y las respuestas adaptativas al estrés, e interactúa con redes de señalización que remodelan la salida traduccional durante la diferenciación y los desafíos metabólicos. La expresión o actividad desregulada de CPEB4 se ha vinculado con proteostasis alterada y firmas aberrantes de expresión génica en biología del cáncer, en contextos del neurodesarrollo y las neurodegeneraciones, y en fenotipos inflamatorios. Estas propiedades convierten a CPEB4 en un nodo útil para diseccionar regulones de ARN, mecanismos de control traduccional y el reconfigurado a nivel de rutas en condiciones relevantes para la enfermedad.

CPEB4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CPEB4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CPEB4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CPEB4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CPEB4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CPEB4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CPEB4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CPEB4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CPEB4 en células tumorales con expresión de CPEB4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.