COL8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419753

Übersicht

Col8a1 kodiert Kollagen Typ VIII Alpha 1 (COL8A1), ein nichtfibrilläres extrazelluläres Matrixkollagen, das besonders in basement-membran-assoziierten Matrizes und gefäßassoziierten Bindegeweben angereichert ist. COL8A1 trägt zur Matrixassemblierung, zur Zell–Matrix-Adhäsion und zur Regulation zellulärer Verhaltensweisen wie Migration und Proliferation bei, unter anderem über Interaktionen mit Integrinen und Remodeling-Netzwerke unter Beteiligung der MMP-Aktivität. In Mausmodellen werden veränderte Col8a1-Expression und die Ablagerung von Kollagen VIII häufig im Kontext von vaskulärem Remodeling, fibrotischer Matrixakkumulation und wundassoziierter Reorganisation der extrazellulären Matrix untersucht. Diese Prozesse überschneiden sich mit TGF-β-reaktiven Programmen und umfassenderen Signalwegen der extrazellulären Matrix, die Gewebearchitektur und entzündliche Mikroumgebungen prägen.

Das COL8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Col8a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Col8a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Col8a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COL8A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Col8a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COL8A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Col8a1-Exone abzielen, die für die COL8A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Col8a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COL8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom COL8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Col8a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COL8A1 HDR-Plasmid (m) und COL8A1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Col8a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Col8a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.