Plasmide Double Nickase (h) COL1A2: sc-400598-NIC

COL1A2 code la chaîne pro‑α2 du collagène de type I, un collagène fibrillaire majeur qui s'assemble en hétérotrimères avec COL1A1 pour former l'armature structurelle de la matrice extracellulaire dans l'os, les tendons, le derme et d'autres tissus conjonctifs. La biosynthèse et la maturation du collagène de type I impliquent la maturation du procollagène, la formation de la triple hélice, la sécrétion et la fibrillogenèse extracellulaire, en coordination avec les voies d'adhésion médiée par les intégrines, de mécanotransduction et de remodelage de la matrice. Une expression ou une séquence altérée de COL1A2 peut perturber l'organisation des fibres de collagène et la rigidité de la matrice, compromettant l'intégrité tissulaire et modifiant la signalisation cellule–matrice dans des contextes musculosquelettiques et fibrotiques. En tant que composant central de la MEC, COL1A2 est fréquemment étudié dans la différenciation des ostéoblastes, la réparation des plaies, la biologie stromale et la régulation, par la matrice, de la disponibilité des facteurs de croissance.

COL1A2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL1A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL1A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL1A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL1A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.