Plásmido Doble Nickase (h2) CNOT6: sc-406273-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)CNOT6 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CNOT6 (h2) y el plásmido de doble nickasa CNOT6 (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CNOT6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CNOT6 Anticuerpo (2193C2a): sc-81231
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) CNOT6 | sc-406273-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano CNOT6 codifica la subunidad 6 del complejo CCR4-NOT, una deadenilasa citoplasmática que acorta las colas poli(A) del ARNm para favorecer la inestabilidad del transcrito y la represión de la traducción, modulando así programas de expresión génica aguas abajo de proteínas de unión a ARN y del silenciamiento mediado por microARN. Como componente catalítico del complejo CCR4-NOT, CNOT6 contribuye al control posranscripcional de la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés mediante el recambio regulado de ARNm y sus interacciones con la maquinaria de decapado y degradación. La desregulación de la actividad de CNOT6 y de la homeostasis del ARN dependiente de CCR4-NOT se ha asociado con señales proliferativas alteradas y con patrones de expresión de genes relacionados con la inmunidad observados en diversos cánceres y en contextos inflamatorios. La edición génica o la perturbación de CNOT6 facilita estudios mecanísticos de la cinética de degradación del ARNm, la dinámica de la cola poli(A) y los efectos a nivel de rutas sobre la estabilidad del transcriptoma en modelos celulares humanos.
CNOT6 El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CNOT6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CNOT6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CNOT6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CNOT6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.