Particules Lentivirales d'Activation (h) CLEC-2D: sc-412035-LAC

CLEC2D code pour la protéine CLEC-2D, un ligand de type lectine C qui se lie au récepteur inhibiteur KLRB1/CD161 exprimé par les cellules NK et certains sous-types de lymphocytes T, contribuant à une régulation de type « point de contrôle immunitaire » de la cytotoxicité et de la production de cytokines. En modulant le dialogue NK–T à la surface cellulaire, CLEC-2D influence la reconnaissance immunitaire dans des microenvironnements inflammatoires et associés aux tumeurs et peut affecter les réponses au stress cellulaire. Des altérations de l’expression de CLEC2D ont été associées à des phénotypes d’échappement immunitaire et à une inflammation tissulaire dérégulée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’immunosurveillance, de la tolérance et des programmes d’activation des leucocytes. La fonction de CLEC-2D est fréquemment étudiée dans des contextes reliant la signalisation ligand–récepteur à des changements transcriptionnels dans les cellules effectrices ainsi que dans les compartiments présentateurs d’antigènes ou stromaux.

Les particules d'activation lentivirales CLEC-2D (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CLEC2D dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CLEC-2D (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CLEC2D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CLEC-2D. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CLEC2D ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.