CKR-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402548-ACT

CCR5 codifica o receptor humano de quimiocinas CKR-5, um GPCR de sete hélices transmembrana expresso predominantemente em células T, macrófagos e células dendríticas, onde se liga a ligantes como CCL3, CCL4 e CCL5 para orientar a quimiotaxia de leucócitos. A sinalização do CKR-5 envolve proteínas G heterotriméricas para ativar vias que incluem PI3K/AKT, fluxo de cálcio mediado por PLCβ, MAPK/ERK e remodelação do citoesqueleto, que coordenam a migração celular e respostas inflamatórias. Pelo seu papel no tráfego e na ativação de células imunes, o CCR5 é amplamente estudado em inflamação e na vigilância imune dos tecidos, e diferenças genéticas ou de expressão têm sido associadas a variações na suscetibilidade e na progressão em múltiplos contextos de doenças imunomediadas e infecciosas. Em sistemas experimentais, a expressão de CCR5 é frequentemente usada como uma medida de leitura para sinalização mediada por receptor, detecção de gradientes de quimiocinas e modulação do comportamento de células mieloides e linfoides.

CKR-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCR5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CKR-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCR5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCR5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CKR-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCR5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CKR-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CKR-5 em células tumorais com expressão de CCR5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.