citrin Double Nickase Plasmid (m): sc-424510-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das citrin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- citrin Double-Nickase-Plasmid (m) und citrin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc25a13 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: citrin: sc-393303
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
citrin Double Nickase Plasmid (m) | sc-424510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
citrin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Slc25a13 kodiert Citrin, einen Aspartat–Glutamat-Carrier der inneren Mitochondrienmembran, der den Malat–Aspartat-Shuttle unterstützt und das zytosolische und mitochondriale Redoxgleichgewicht mit dem Intermediärstoffwechsel verknüpft. Durch den Austausch von Aspartat und Glutamat über die innere Membran hilft Citrin, den Aminosäurestoffwechsel, die an den Harnstoffzyklus gekoppelte Stickstoffverarbeitung und den gluconeogenen Fluss über die Bereitstellung von Aspartat zu koordinieren. Eine veränderte SLC25A13-Funktion ist in Modellsystemen mit Phänotypen metabolischer Dysregulation assoziiert, wodurch Slc25a13 einen nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung mitochondrialer Transportprozesse, des Energiestoffwechsels von Hepatozyten und der systemischen Nährstoffhomöostase darstellt. In Mäusen bietet die Störung des citrinabhängigen Transports einen gut handhabbaren Ansatz, um Signalwege zu untersuchen, die die Aktivität mitochondrialer Carrier mit Redoxzustand und Stickstoffstoffwechsel koppeln.
citrin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc25a13-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc25a13 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc25a13-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc25a13-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.