Plásmido Doble Nickase (h) CIDE-A: sc-405086-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CIDE-A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CIDE-A (h) y el plásmido de doble nickasa CIDE-A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CIDEA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CIDE-A Anticuerpo (4B9): sc-293289
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CIDE-A | sc-405086-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CIDE-A | sc-405086-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CIDEA codifica CIDE-A, una proteína asociada a las gotas lipídicas y enriquecida en adipocitos que favorece el almacenamiento de triglicéridos y regula el crecimiento de las gotas lipídicas, conectando el balance energético celular con el metabolismo del tejido adiposo. CIDE-A participa en vías que controlan la lipólisis, la actividad oxidativa mitocondrial y la programación termogénica, integrando el estado nutricional con el manejo de lípidos. La expresión alterada de CIDEA se ha asociado con fenotipos metabólicos relacionados con la obesidad, cambios en la sensibilidad a la insulina, esteatosis hepática y una desregulación más amplia de la homeostasis lipídica. Como resultado, CIDE-A es una diana útil para estudiar la diferenciación de adipocitos, la biología de las gotas lipídicas y las respuestas al estrés metabólico en modelos celulares humanos.
CIDE-A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CIDEA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CIDEA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CIDEA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CIDEA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.