CHTOP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411874-ACT

CHTOP (chromatin target of PRMT1) kodiert ein nukleäres RNA-bindendes Protein, das als Kofaktor bei der mRNA-Biogenese und dem Export fungiert und chromatinassoziierte Ereignisse mit der posttranskriptionellen Genregulation verknüpft. Es ist am TREX-mRNA-Exportweg beteiligt und koppelt die Transkriptionsleistung über Interaktionen mit der RNA-Prozessierungs- und Transportmaschinerie an einen effizienten nukleären Export. CHTOP steht zudem mit einer argininmethylierungsabhängigen Regulation in Zusammenhang und beeinflusst alternatives Spleißen, die Assemblierung von Ribonukleoproteinen sowie genomweite Expressionsprogramme. Eine fehlregulierte CHTOP-Aktivität wurde mit verändertem RNA-Stoffwechsel und proliferativen Signalzuständen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen mit gestörter Kontrolle der Genexpression relevant sind.

CHTOP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHTOP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CHTOP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHTOP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHTOP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CHTOP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHTOP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CHTOP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CHTOP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHTOP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.