CHTOP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411874-ACT

CHTOP (chromatin target of PRMT1) codifica uma proteína nuclear de ligação a RNA que atua como cofator na biogênese e exportação de mRNA, integrando eventos associados à cromatina com a regulação gênica pós-transcricional. Ela participa da via TREX de exportação de mRNA e conecta a produção transcricional a uma exportação nuclear eficiente por meio de interações com a maquinaria de processamento e transporte de RNA. CHTOP também está relacionada à regulação dependente de metilação de arginina e influencia o splicing alternativo, a montagem de ribonucleoproteínas e programas de expressão em todo o genoma. A atividade desregulada de CHTOP tem sido associada a alterações no metabolismo de RNA e a estados de sinalização proliferativa relevantes para a biologia do câncer e outras doenças caracterizadas por controle comprometido da expressão gênica.

CHTOP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHTOP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHTOP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHTOP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHTOP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHTOP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHTOP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHTOP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHTOP em células tumorais com expressão de CHTOP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.