Plasmide CRISPR d'Activation (h) CHSY1: sc-405999-ACT

CHSY1 (chondroitin sulfate synthase 1) code une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la polymérisation des chaînes de sulfate de chondroïtine sur les protéines cœur des protéoglycanes. En pilotant la biosynthèse des glycosaminoglycanes, CHSY1 façonne la composition de la matrice extracellulaire et module l’adhérence, la migration et la présentation des facteurs de croissance, avec des effets en aval sur la mise en place des patrons du développement et l’homéostasie tissulaire. Une assemblage altéré du sulfate de chondroïtine est lié à une dérégulation de la signalisation des morphogènes et au remodelage de la matrice, et des variations de CHSY1 ont été associées à des phénotypes squelettiques et des membres congénitaux ainsi qu’à des contextes de prolifération aberrante. Ces caractéristiques biologiques font de CHSY1 un nœud utile pour étudier la signalisation médiée par les protéoglycanes et la régulation du comportement cellulaire dépendante de la matrice extracellulaire.

CHSY1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHSY1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CHSY1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHSY1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHSY1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CHSY1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHSY1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CHSY1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CHSY1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHSY1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.