Partículas Lentivirales de Activación (h) Chk1: sc-400223-LAC
- Especies Diana: human
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h) Chk1 es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h) Chk1 incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el Chk1 Plásmido de activación lentiviral (h) y el Chk1 Plásmido de activación lentiviral (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor CHEK1. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Chk1 Anticuerpo (G-4): sc-8408
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (h) Chk1 | sc-400223-LAC | 200 µl | $455.00 |
El gen humano **CHEK1** codifica la quinasa de punto de control 1 (Chk1), una quinasa de serina/treonina que coordina la respuesta al daño del ADN dependiente de ATR frente al estrés replicativo. Chk1 regula la progresión de la fase S y el punto de control G2/M mediante la fosforilación de efectores que restringen la actividad de las CDK, estabilizan las horquillas de replicación detenidas y promueven la reparación asociada a la recombinación homóloga y el arresto del ciclo celular. Este eje de señalización se integra con vías que gobiernan la integridad del genoma, incluida la protección de las horquillas de replicación, el control del disparo de los orígenes y la entrada en mitosis, lo que hace que la actividad de CHEK1 sea altamente relevante para los mecanismos de inestabilidad cromosómica. La desregulación de la salida de la vía de CHEK1 se estudia con frecuencia en el contexto de la biología tumoral, las respuestas al estrés genotóxico y los determinantes de la sensibilidad a perturbaciones que dañan el ADN en sistemas modelo.
Las partículas de activación lentiviral Chk1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CHEK1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral Chk1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CHEK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Chk1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CHEK1 y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.