Plasmide CRISPR d'Activation (h) CGRP2: sc-401165-ACT

Le gène humain **CALCB** code le peptide 2 lié au gène de la calcitonine (**CGRP2**), un neuropeptide issu de la famille des gènes de la calcitonine, qui transmet ses signaux via le complexe récepteur du CGRP (**CALCRL** associé à **RAMP1**) afin de réguler des voies dépendantes de l’AMPc. CGRP2 contribue à la communication neurovasculaire en modulant la vasodilatation, le tonus vasculaire et la signalisation neurogène inflammatoire, et peut influencer les réponses du muscle lisse et des cellules immunitaires dans les tissus périphériques. Une dérégulation de la signalisation de la famille CGRP a été associée à des altérations du traitement nociceptif et de l’homéostasie vasculaire, faisant de **CALCB** une cible pertinente pour l’étude de la biologie des neurones sensoriels, du dialogue endothélio‑neuronal et des mécanismes de douleur inflammatoire. Dans le cancer et d’autres affections chroniques, des modifications de la signalisation des neuropeptides peuvent façonner le microenvironnement tissulaire et les voies de réponse au stress, ce qui soutient l’étude de **CALCB** dans des modèles de communication cellule‑cellule.

CGRP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CALCB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CGRP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CALCB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CALCB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CGRP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CALCB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CGRP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CGRP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CALCB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.