Plasmide Double Nickase (m) ceruloplasmin: sc-419776-NIC

Le gène murin **Cp** code la céruloplasmine, une ferroxydase multicuprique sécrétée qui oxyde Fe2+ en Fe3+ afin de favoriser le chargement de la transferrine et le transport systémique du fer. En coopération avec l’export du fer dépendant de la ferroportine, la céruloplasmine contribue au maintien de l’homéostasie du fer cellulaire, limite l’accumulation de fer redox-actif et influence les réponses au stress oxydant. L’activité de la céruloplasmine interfère avec le métabolisme du cuivre et les programmes inflammatoires de phase aiguë, reliant la sécrétion par les hépatocytes et la gestion du fer par les macrophages à une régulation métabolique plus large. La dérégulation de **Cp** est utilisée pour modéliser des perturbations de l’équilibre fer/cuivre et des lésions oxydatives pertinentes pour la neurobiologie, la physiologie hépatique et la pathologie inflammatoire dans des systèmes murins.

ceruloplasmin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cp. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cp. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cp.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.