Plasmide CRISPR/Cas9 KO Centriolin (h): sc-404195

Présentation

CNTRL code la centrioline, une protéine d’échafaudage associée au centrosome et au corps intermédiaire (midbody), indispensable à la maturation du centrosome, à la progression mitotique et à l’achèvement de la cytokinèse. La centrioline favorise le recrutement et l’organisation de complexes protéiques au niveau du centriole mère et du midbody, en coordonnant des structures dépendantes des microtubules qui assurent le bon fonctionnement du fuseau mitotique et l’abscission. Une perturbation de CNTRL peut dérégler l’homéostasie du centrosome, entraîner un échec de la cytokinèse et favoriser l’instabilité chromosomique, des processus pertinents pour l’étude de l’aneuploïdie et du stress prolifératif dans des modèles de cellules humaines. CNTRL constitue donc un nœud d’intérêt pour étudier la régulation du centrosome, les points de contrôle du cycle cellulaire et le contrôle du plan de division.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Centriolin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CNTRL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CNTRL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CNTRL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Centriolin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CNTRL pour l'étude de la signalisation de Centriolin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CNTRL essentiels à la fonction de Centriolin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CNTRL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Centriolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Centriolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CNTRL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Centriolin plasmide HDR (h) et le Centriolin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CNTRL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CNTRL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.