Plásmido Doble Nickase (h) Centrin-2: sc-400867-NIC

CETN2 codifica la centrina-2, una proteína conservada de unión a calcio con motivo EF-hand que se localiza en los centrosomas y los cuerpos basales, donde favorece la duplicación de los centríolos, la cohesión del centrosoma y la organización de los microtúbulos asociados a los cilios. La centrina-2 participa en el control, vinculado al ciclo celular, de la nucleación de microtúbulos y el ensamblaje del huso mitótico, y contribuye a la estabilidad del genoma mediante la homeostasis del centrosoma y sus interacciones con factores asociados a la reparación del ADN. La alteración de la integridad del centrosoma y de las vías de ciliogénesis conectadas con la función de las centrinas se asocia con frecuencia a inestabilidad cromosómica y a fenotipos proliferativos relevantes para la biología del cáncer. Por ello, CETN2 se utiliza ampliamente como marcador y como nodo mecanístico en estudios de la dinámica del centrosoma, la fidelidad de la división celular y los procesos celulares relacionados con los cilios.

Centrin-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CETN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CETN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CETN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CETN2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.