CENP-S Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417249

Descripción general

CENPS codifica la proteína del centrómero S (CENP-S), un componente conservado de la red constitutiva asociada al centrómero que sustenta la integridad del cinetocoro y la segregación cromosómica precisa. CENP-S participa en el ensamblaje del centrómero y del cinetocoro y contribuye a la estabilidad del genoma al promover una progresión mitótica adecuada. La alteración de las vías del centrómero y del cinetocoro está estrechamente relacionada con la inestabilidad cromosómica y la aneuploidía, procesos que se investigan con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer y del estrés proliferativo. CENP-S también se estudia en la intersección entre las respuestas al daño del ADN asociado a la replicación y la fidelidad mitótica, donde los defectos pueden sensibilizar a las células a perturbaciones genotóxicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CENP-S (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CENPS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CENPS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CENPS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CENP-S.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CENPS para la investigación de la señalización de CENP-S, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CENPS críticos para la función de CENP-S
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CENPS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CENP-S CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CENP-S CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CENPS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CENP-S (h) y el plásmido HDR CENP-S (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CENPS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CENPS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.