Plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-A (h): sc-402359

Présentation

CENPA code pour CENP-A, une variante de l’histone H3 qui remplace l’H3 canonique au niveau des centromères afin d’établir la chromatine centromérique et de spécifier l’identité du kinétochore. Le dépôt et le maintien de CENP-A sont coordonnés avec les voies d’assemblage du centromère et la progression du cycle cellulaire mitotique, assurant un alignement et une ségrégation corrects des chromosomes. Une perturbation des niveaux de CENP-A ou de sa localisation au centromère déstabilise la fonction du kinétochore, favorise l’instabilité chromosomique et l’aneuploïdie, et est fréquemment étudiée dans le cadre des défauts de maintien du génome observés dans de nombreux modèles de cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CENPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CENPA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CENPA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CENP-A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CENPA pour l'étude de la signalisation de CENP-A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CENPA essentiels à la fonction de CENP-A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CENPA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CENP-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CENP-A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CENPA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CENP-A plasmide HDR (h) et le CENP-A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CENPA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CENPA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.