CEACAM5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401219-ACT

CEACAM5 (molecola di adesione cellulare 5 correlata all’antigene carcinoembrionario) è una proteina della superfamiglia delle immunoglobuline ancorata tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI), espressa sulla superficie apicale delle cellule epiteliali, dove contribuisce all’adesione cellula–cellula e al mantenimento dell’architettura tissutale. Attraverso interazioni omofiliche ed eterofiliche, CEACAM5 può influenzare la differenziazione epiteliale, la polarità e la segnalazione dipendente dal contatto, che si intreccia con vie dipendenti dall’adesione e con il rimodellamento del glicocalice della superficie cellulare. Un’espressione deregolata di CEACAM5 è frequentemente associata a neoplasie epiteliali ed è ampiamente utilizzata come marcatore molecolare negli studi di biologia delle cellule tumorali, inclusi invasione, metastasi e interazioni immunitarie nel microambiente tumorale. La sua localizzazione di superficie e la sua espressione variabile nei diversi contesti la rendono un nodo utile per indagare i cambiamenti dello stato epiteliale e i programmi di segnalazione oncogenici.

CEACAM5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CEACAM5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CEACAM5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CEACAM5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CEACAM5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CEACAM5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CEACAM5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CEACAM5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CEACAM5 nelle cellule tumorali con espressione di CEACAM5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.