Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cdx1: sc-402522-ACT

CDX1 code le facteur de transcription à homéoboîte de type caudal Cdx1, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui contribue à établir la polarité antéro-postérieure et à orienter la différenciation de l’épithélium intestinal. Dans les cellules humaines, CDX1 s’intègre à des réseaux de signalisation du développement tels que Wnt/β-caténine et aux programmes transcriptionnels répondant à l’acide rétinoïque afin de contrôler l’expression génique restreinte à certaines lignées et la maturation épithéliale. Des altérations de l’expression de CDX1 ont été associées à des changements de destinée épithéliale et à des états de différenciation dérégulés dans les tissus gastro-intestinaux, ce qui en fait un levier moléculaire utile pour étudier le remodelage transcriptionnel dans des modèles pertinents pour les maladies. En tant que régulateur à homéoboîte, Cdx1 est également utilisé pour explorer comment les éléments cis-régulateurs et le contexte de la chromatine façonnent les décisions d’identité cellulaire.

Cdx1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cdx1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cdx1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cdx1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cdx1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.