CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-400570-KO-2

Übersicht

CDKN2B kodiert p15^INK4B, einen cyclinabhängigen Kinaseinhibitor, der an CDK4/6 bindet, um die cyclin‑D‑abhängige Phosphorylierung von RB zu begrenzen und den G1/S‑Checkpoint durchzusetzen. Seine Expression wird häufig durch antiproliferative Signale wie die TGF‑β‑Signalübertragung induziert und verknüpft damit extrazellulären Stress sowie Differenzierungsprogramme mit Zellzyklusarrest und Seneszenz. CDKN2B ist im 9p21‑Lokus verankert, einer Genomregion, die in Krebs häufig verändert ist und mit der Anfälligkeit für verschiedene altersassoziierte sowie kardiometabolische Merkmale in Verbindung gebracht wird. Eine Fehlregulation der p15^INK4B‑vermittelten Kontrolle von CDK4/6 trägt zu aberranter Proliferation, veränderter Linienfestlegung und zum Entkommen aus wachstumshemmenden Signalwegen bei.

Das CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDKN2B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDKN2B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDKN2B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CDKN2B/p15 INK4B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDKN2B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CDKN2B/p15 INK4B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDKN2B-Exone abzielen, die für die CDKN2B/p15 INK4B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDKN2B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CDKN2B/p15 INK4B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDKN2B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CDKN2B/p15 INK4B HDR-Plasmid (h) und CDKN2B/p15 INK4B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDKN2B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDKN2B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.