CD97 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404492-ACT

ADGRE5 codifica o CD97, um receptor de adesão acoplado à proteína G (aGPCR) expresso de forma proeminente em leucócitos, onde sustenta interações célula–célula e célula–matriz durante a vigilância imunitária e a inflamação. O CD97 liga-se a ligandos como CD55/DAF e a componentes da matriz extracelular, associando a adesão a programas de sinalização que regulam a migração, a ativação e a infiltração nos tecidos. Por meio de vias associadas a GPCR e de remodelação do citoesqueleto, o CD97 contribui para o tráfego de leucócitos e para a comunicação intercelular em microambientes inflamados. Alterações na expressão de CD97 têm sido associadas à desregulação imunitária e a características da biologia tumoral, tornando o ADGRE5 um alvo útil para estudar o crosstalk imune–estroma e a sinalização dependente do microambiente.

CD97 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADGRE5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD97 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADGRE5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADGRE5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD97. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADGRE5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD97 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD97 em células tumorais com expressão de ADGRE5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.