CD89 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403014-ACT

FCAR codifica o CD89 (FcαRI), um recetor Fc de imunoglobulina A (IgA) expresso principalmente em células mieloides, como neutrófilos, monócitos, macrófagos e eosinófilos. A ligação do CD89 por complexos imunes de IgA desencadeia sinalização dependente da cadeia γ dos FcR através da fosforilação de ITAM, ativando SYK, PI3K, MAPK e programas efetores inflamatórios e antimicrobianos a jusante, incluindo fagocitose, desgranulação, libertação de citocinas e citotoxicidade celular dependente de anticorpos. Ao modular a imunidade mediada por IgA nas mucosas e a nível sistémico, o FCAR influencia a comunicação entre a imunidade inata e adaptativa e o processamento de complexos imunes. A sinalização desregulada do CD89 e alterações na expressão do recetor têm sido associadas a patologia inflamatória e autoimune, incluindo nefropatia por IgA e outras doenças impulsionadas por complexos imunes, reforçando a sua relevância para estudos de imunologia mecanística.

CD89 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FCAR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD89 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FCAR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FCAR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD89. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FCAR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD89 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD89 em células tumorais com expressão de FCAR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.