Plásmido Doble Nickase (h) CD8-α: sc-400372-NIC

CD8A codifica CD8-α, una glicoproteína transmembrana de tipo I que forma homodímeros CD8αα o heterodímeros CD8αβ en los linfocitos T y en un subconjunto de células NK. CD8-α funciona como correceptor del reconocimiento de antígenos restringido por MHC de clase I al asociarse con el complejo del TCR y reclutar LCK para amplificar la señalización proximal del TCR, favoreciendo la diferenciación efectora citotóxica y la formación de la sinapsis inmunológica. A través de su impacto en vías aguas abajo como la fosforilación de ZAP70, la señalización MAPK y programas transcripcionales dependientes de calcio, CD8A ayuda a moldear las respuestas específicas de antígeno y la vigilancia inmunitaria. Los cambios en la expresión de CD8A y en los patrones de infiltración de linfocitos T CD8+ se usan ampliamente como correlatos inmunológicos en estudios de infección, autoinmunidad y microambiente tumoral, aportando información sobre mecanismos de evasión inmunitaria y disfunción de las células T.

CD8-α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD8A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD8A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD8A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD8A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.