Plasmide Double Nickase (h) CD74: sc-400279-NIC

CD74 code la chaîne invariante (Ii), une protéine transmembranaire de type II qui agit comme un chaperon essentiel des molécules du CMH de classe II dans les cellules présentatrices d'antigènes. En occupant la rainure de liaison des peptides dans le réticulum endoplasmique et en orientant le trafic du CMH II à travers les compartiments endosomaux, CD74 facilite le chargement des peptides et leur présentation aux lymphocytes T CD4+ dans le cadre de la signalisation immunitaire adaptative. CD74 sert aussi de composant récepteur à la surface cellulaire pour le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MIF), le reliant à des voies en aval telles que NF-κB et MAPK, qui régulent l'inflammation, la survie cellulaire et l'activation des cellules immunitaires. Une expression et une signalisation dérégulées de CD74 ont été associées à des pathologies d'origine immunitaire et sont fréquemment étudiées dans le contexte des hémopathies malignes et des microenvironnements inflammatoires.

CD74 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD74 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD74. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD74. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD74.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.