CD3-γ Double Nickase Plasmid (h): sc-402537-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD3-γ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD3-γ Double-Nickase-Plasmid (h) und CD3-γ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD3G abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD3-γ: sc-393271
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD3-γ Double Nickase Plasmid (h) | sc-402537-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD3-γ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402537-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD3G kodiert die CD3-γ‑Untereinheit des T‑Zell‑Rezeptor(TCR)‑CD3‑Komplexes, eine essenzielle Komponente für die antigenabhängige Aktivierung von T‑Zellen und die Weiterleitung von Signalen. CD3‑γ trägt zur Assemblierung des TCR, zu dessen Oberflächenexpression sowie zur Einleitung nachgeschalteter Signalübertragung bei, indem es über ITAM‑vermittelte Rekrutierung von Kinasen Signalwege wie LCK/ZAP70, MAPK, NF‑κB und NFAT ankoppelt. Über diese Kaskaden beeinflusst CD3‑γ die Entwicklung von Thymozyten, die T‑Zell‑Selektion und Effektor‑Funktionen einschließlich der Zytokinproduktion. Eine veränderte Expression oder Funktion von CD3G ist relevant für Studien zur Immunfehlregulation, zu T‑Zell‑Immundefizienz‑Phänotypen sowie zu Mechanismen, die die Stärke der TCR‑Signalübertragung und die Toleranz steuern.
CD3-γ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD3G-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD3G abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD3G-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD3G-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.