Plásmido CRISPR de Activación (h) CD2AP: sc-401218-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) CD2AP es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) CD2AP incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR CD2AP (h) y el plásmido de activación CRISPR CD2AP (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de CD2AP. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD2AP Anticuerpo (B-4): sc-25272
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) CD2AP | sc-401218-ACT | 20 µg | $397.00 |
El CD2AP humano codifica la proteína asociada a CD2, un adaptador/andamiaje que acopla receptores de membrana al citoesqueleto de actina y coordina la endocitosis, el tráfico vesicular y la transducción de señales. CD2AP participa en la organización del diafragma de hendidura y del citoesqueleto de los podocitos, en la internalización de receptores y en la estabilidad de las uniones mediante interacciones con nefrina, c-Cbl y complejos reguladores de actina, influyendo en PI3K/AKT y vías relacionadas que controlan la supervivencia y la morfología celular. La expresión o función alteradas de CD2AP se han asociado con defectos de la barrera de filtración glomerular, enfermedad renal proteinúrica y fenotipos más amplios vinculados a una dinámica del citoesqueleto y a una señalización de células inmunitarias desreguladas. Por ello, este gen se estudia ampliamente en modelos de biología de podocitos, tráfico de membrana y redes de señalización impulsadas por receptores.
CD2AP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD2AP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
CD2AP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD2AP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD2AP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD2AP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD2AP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD2AP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD2AP en células tumorales con expresión de CD2AP silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.