CD223 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406616-ACT

LAG3（CD223）は抑制性の免疫チェックポイント受容体で、主に活性化T細胞、制御性T細胞（Treg）、NK細胞、および一部の樹状細胞サブセットに発現し、抗原刺激に依存した活性化とエフェクター機能を調節します。MHCクラスIIや関連リガンドに結合することで、CD223はTCRシグナル伝達を減弱させ、末梢免疫寛容、T細胞疲弊プログラム、サイトカイン産生の制御に寄与します。LAG3の活性は、免疫シナプスの組織化、共刺激／チェックポイントのネットワーク、炎症性の転写状態を司る経路と相互に関わります。CD223シグナルの破綻は、慢性感染に伴う免疫疲弊、腫瘍における免疫回避、自己免疫性炎症に関与するとされており、機序免疫学研究において重要な標的となっています。

CD223 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LAG3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD223 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LAG3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLAG3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD223の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLAG3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD223依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLAG3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD223経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。