Particules Lentivirales d'Activation (h) CD20: sc-416765-LAC

MS4A1 code pour CD20, une protéine membranaire tétraspan fortement exprimée à la surface des cellules de la lignée B, qui régule les flux de calcium et la signalisation dépendante du récepteur des cellules B (BCR). CD20 contribue à l’activation, à la prolifération et à la différenciation des cellules B via des voies qui croisent les signalisations PI3K–AKT, NF-κB et MAPK, et qui modulent les réponses induites par l’antigène. Une expression altérée de MS4A1/CD20 est étroitement associée à l’identité de la lignée B et aux états du microenvironnement immunitaire, ce qui en fait une caractéristique moléculaire fréquemment étudiée dans les modèles de malignités des cellules B et de dérégulation des cellules B liée à l’auto-immunité. En conséquence, MS4A1 constitue un nœud utile pour explorer les circuits de signalisation des cellules B, les transitions de lignée et l’hétérogénéité immunophénotypique dans des systèmes cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales CD20 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MS4A1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD20 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MS4A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD20. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MS4A1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.