CD163 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429989-ACT

マウスCd163は、SRCRファミリーに属するマクロファージ特異的なスカベンジャー受容体であるCD163をコードしており、ヘモグロビン–ハプトグロビン複合体に結合してそのエンドサイトーシスを促進することで、HO-1経路を介したヘム代謝と鉄リサイクルを支えます。CD163は、代替的に活性化された（M2様）マクロファージの代表的マーカーであり、炎症の収束、サイトカインネットワーク、組織リモデリングを形成するクリアランス（除去）プログラムに関与します。その発現は炎症性シグナルによって調節され、自然免疫シグナル伝達や貪食に伴う細胞内輸送（トラフィッキング）とも交差して、マクロファージの分極状態に影響を及ぼします。マウスモデルでは、CD163発現レベルの変動が、慢性炎症、線維化リモデリング、代謝異常、感染、ならびに腫瘍関連マクロファージの生物学におけるマクロファージの関与を解釈するための指標としてしばしば用いられます。

CD163 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cd163の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD163 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cd163 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCd163転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD163の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCd163遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD163依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCd163発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD163経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。