CD154 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423452
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD154 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD154, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD154 Anticuerpo (F-1): sc-374635
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD154 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423452 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cd40lg codifica CD154 (ligando de CD40), una proteína de membrana tipo II expresada principalmente en linfocitos T activados, que se une a CD40 en linfocitos B, células dendríticas y macrófagos para coordinar las respuestas inmunitarias adaptativas. La señalización CD154–CD40 activa las vías de NF-κB y MAPK, promueve la producción de citocinas, favorece la proliferación de los linfocitos B y las reacciones del centro germinal, y contribuye al cambio de clase de las inmunoglobulinas. En modelos murinos, la alteración de la actividad de Cd40lg influye en la tolerancia inmunitaria, la presentación de antígenos y los circuitos inflamatorios relevantes para la autoinmunidad, la biología de las infecciones y la inmunología tumoral. Por ello, desentrañar la coestimulación dependiente de CD154 es fundamental para estudiar la comunicación entre células T y CPA (células presentadoras de antígeno) y la organización del tejido linfoide.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD154 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd40lg en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd40lg junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd40lg tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD154.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd40lg para la investigación de la señalización de CD154, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cd40lg críticos para la función de CD154
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd40lg para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD154 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD154 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd40lg. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD154 (m) y el plásmido HDR CD154 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd40lg para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd40lg definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.