CD151 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401969-NIC

CD151はテトラスパニンに属する細胞表面糖タンパク質であり、テトラスパニン富化マイクロドメインを形成・編成するとともに、相互作用する受容体（とくにα3β1、α6β1、α6β4などのインテグリン）の活性や輸送（トラフィッキング）を調節する。これらの相互作用を介して、CD151は細胞接着、伸展、遊走に加え、細胞骨格の再編成、フォーカルアドヒージョンの動態、細胞外マトリックス（ECM）との結合に関連するシグナル伝達に影響を及ぼす。CD151依存的な膜構造の編成は、上皮の恒常性、血管新生に関わる挙動、免疫細胞の運動性などの過程にも影響し、CD151の発現や機能の変化は、腫瘍進展、転移能、ならびに組織リモデリングに関わる表現型と関連づけられている。足場（スキャフォールド）的な制御因子として、CD151はヒト細胞におけるインテグリン関連シグナルネットワークと膜コンパートメント化を解析するうえで、扱いやすい重要な結節点となる。

CD151 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD151 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD151内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD151の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD151が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。