CD138/SDC1/Syndecan-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423235-NIC

Sdc1 codifica la sindecano-1 (CD138), un proteoglicano transmembrana a eparan solfato che regola l’adesione cellula–cellula e cellula–matrice, la presentazione dei fattori di crescita e il sequestro delle chemochine sulla superficie cellulare. Legandosi a componenti della matrice extracellulare e a ligandi quali membri delle famiglie FGF e VEGF, CD138 modula vie di segnalazione tra cui MAPK/ERK, PI3K/AKT e la dinamica delle adesioni focali dipendenti dalle integrine, influenzando proliferazione, migrazione e organizzazione della barriera epiteliale. Nei tessuti murini, Sdc1 contribuisce alle interazioni tra cellule immunitarie e alla riparazione delle ferite tramite il controllo dei segnali infiammatori e del rimodellamento della matrice extracellulare. Un’espressione o uno shedding (distacco) deregolati di CD138 sono associati a stati alterati di adesione e segnalazione, rilevanti per la biologia del cancro, l’infiammazione e la ricerca sull’omeostasi tissutale.

CD138/SDC1/Syndecan-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sdc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sdc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sdc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sdc1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.