Plásmido CRISPR de Activación (h) CD13: sc-401095-ACT

ANPEP codifica CD13 (aminopeptidasa N), una metaloproteasa de membrana tipo II dependiente de zinc que escinde aminoácidos neutros N‑terminales de los péptidos en la superficie celular. CD13 participa en el metabolismo de péptidos y en la modulación de las interacciones célula–célula y célula–matriz, influyendo en procesos como la adhesión, la migración y la biología del linaje mieloide. A través de sus funciones enzimáticas y no enzimáticas, CD13 está implicada en redes de señalización inflamatoria y en la remodelación del microambiente extracelular. La expresión alterada de ANPEP/CD13 se ha asociado tanto a contextos hematológicos como a tumores sólidos, así como a la fisiopatología inmunitaria y vascular, lo que respalda su estudio como regulador funcional en estados celulares relevantes para la enfermedad.

CD13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANPEP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANPEP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANPEP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANPEP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD13 en células tumorales con expresión de ANPEP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.