CCP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410133-ACT

Das humane Gen **AGBL2** kodiert die zytosolische Carboxypeptidase 2 (CCP2), eine zinkabhängige Deglutamylase, die Polyglutamat-Seitenketten an Tubulin und anderen Substraten kürzt und so Muster posttranslationaler Modifikationen mitprägt. Durch die Regulation des Gleichgewichts der Glutamylierung beeinflusst CCP2 die Stabilität von Mikrotubuli, den intrazellulären Transport und zilienbezogene Prozesse – mit nachgelagerten Effekten auf Zellteilung und Zytoskelett-Umbau. Eine veränderte Tubulin-Glutamylierung wird mit Defekten der mitotischen Genauigkeit und der neuronalen Funktion in Verbindung gebracht, und eine Fehlregulation von AGBL2 wurde in Zusammenhängen untersucht, die abnorme Proliferation und zelluläre Stressantworten betreffen. Diese Eigenschaften machen CCP2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung des „Tubulin-Codes“ und der mikrotubuli-getriebenen Signalübertragung in menschlichen Zellen.

CCP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AGBL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CCP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AGBL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AGBL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CCP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AGBL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CCP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CCP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AGBL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.