CCDC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406749

Übersicht

CCDC8 (coiled-coil domain containing 8) kodiert ein zytoplasmatisches Coiled-Coil-Protein, dem eine Rolle bei der Regulation von Zellwachstum und Überlebensprogrammen zugeschrieben wird; zudem wurden Zusammenhänge mit stressresponsiver Signalgebung und der Kontrolle der proliferativen Kapazität beschrieben. Funktionelle Studien deuten darauf hin, dass CCDC8 Apoptose- und Checkpoint-assoziierte Prozesse beeinflussen kann und damit an Signalwegen beteiligt ist, die die zelluläre Homöostase und die Anfälligkeit für Transformation mitbestimmen. Eine veränderte Expression oder Störung von CCDC8 wurde im Kontext der Tumorbiologie untersucht, wo Änderungen der Wachstumsregulation und Überlebenssignalgebung häufige Merkmale sind. Diese Eigenschaften machen CCDC8 zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen zu analysieren, die Funktionen zytoskelettaler bzw. scaffoldartiger Proteine mit Signaltransduktion und Zellschicksalsentscheidungen koppeln.

Das CCDC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CCDC8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CCDC8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CCDC8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CCDC8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CCDC8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CCDC8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CCDC8-Exone abzielen, die für die CCDC8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CCDC8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CCDC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CCDC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CCDC8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CCDC8 HDR-Plasmid (h) und CCDC8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CCDC8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CCDC8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.