CBS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400877

Übersicht

Cystathionin-β-Synthase (CBS) ist ein pyridoxalphosphatabhängiges Enzym, das die Kondensation von Serin und Homocystein zu Cystathionin katalysiert und damit Homocystein in den Transsulfurierungsweg einschleust. Durch die Verknüpfung des Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsels mit der Cysteinbiosynthese beeinflusst CBS über die nachgeschaltete Glutathionproduktion das zelluläre Redoxgleichgewicht und trägt zur Homöostase schwefelhaltiger Aminosäuren bei. Die CBS-Aktivität unterstützt außerdem die endogene Bildung von Schwefelwasserstoff (H₂S), was die mitochondriale Funktion und stressresponsive Signalwege beeinflusst. Eine Fehlregulation von CBS wird mit Hyperhomocysteinämie und angeborenen Störungen des Schwefelstoffwechsels in Verbindung gebracht; zudem wurde eine veränderte CBS-Expression im Kontext von oxidativem Stress und metabolischer Umprogrammierung untersucht, die für kardiovaskuläre und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen relevant sind.

Das CBS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CBS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CBS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CBS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CBS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CBS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CBS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CBS-Exone abzielen, die für die CBS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CBS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CBS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CBS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CBS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CBS HDR-Plasmid (h) und CBS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CBS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CBS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.