CBP20 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404124

Descripción general

NCBP2 codifica CBP20, la subunidad pequeña del complejo nuclear de unión a la caperuza, que reconoce la caperuza de 7‑metilguanosina en los transcritos nacientes de la ARN polimerasa II. Al acoplar el reconocimiento de la caperuza al procesamiento del ARN, CBP20 favorece el empalme (splicing) del pre-ARNm, la formación del extremo 3′, la exportación nuclear y las vías de vigilancia del ARN, incluida la degradación del ARNm mediada por codones sin sentido. A través de estas funciones, NCBP2 ayuda a coordinar programas de expresión génica y la integridad del transcriptoma durante el crecimiento celular y las respuestas al estrés. La desregulación del metabolismo del ARN dependiente de la caperuza y del control de calidad del ARNm se ha relacionado con estados transcripcionales oncogénicos y fenotipos del neurodesarrollo, lo que convierte a NCBP2 en un punto útil para estudiar mecanismos de procesamiento de ARN asociados a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CBP20 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NCBP2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NCBP2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NCBP2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CBP20.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NCBP2 para la investigación de la señalización de CBP20, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NCBP2 críticos para la función de CBP20
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NCBP2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CBP20 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CBP20 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NCBP2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CBP20 (h) y el plásmido HDR CBP20 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NCBP2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NCBP2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.