CBP20 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404124

Panoramica

NCBP2 codifica CBP20, la piccola subunità del complesso nucleare di legame al cappuccio (cap-binding complex), che riconosce il cap 7-metilguanosina sui trascritti nascenti prodotti dall’RNA polimerasi II. Collegando il riconoscimento del cap all’elaborazione dell’RNA, CBP20 supporta lo splicing del pre-mRNA, la formazione dell’estremità 3′, l’esportazione nucleare e le vie di sorveglianza dell’RNA, incluso il decadimento dell’mRNA mediato da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay). Attraverso queste funzioni, NCBP2 contribuisce a coordinare i programmi di espressione genica e l’integrità del trascrittoma durante la crescita cellulare e le risposte allo stress. La disregolazione del metabolismo dell’RNA dipendente dal cap e del controllo qualità dell’mRNA è stata collegata a stati trascrizionali oncogenici e a fenotipi di neurosviluppo, rendendo NCBP2 un nodo utile per studiare i meccanismi di processamento dell’RNA associati alle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CBP20 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NCBP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NCBP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NCBP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CBP20.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NCBP2 per lo studio della segnalazione di CBP20, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NCBP2 critici per la funzione di CBP20
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NCBP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CBP20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CBP20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NCBP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CBP20 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CBP20 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NCBP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NCBP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.