Plasmide CRISPR d'Activation (h) caspase-5 p10: sc-401520-ACT

Le gène humain **CASP5** code la caspase-5, une caspase inflammatoire dont la petite sous-unité p10 est produite lors de la maturation protéolytique du zymogène et contribue à la formation du complexe protéase actif. **CASP5** participe à la signalisation de l’immunité innée en aval de la détection cytosolique des signaux de danger, en favorisant une activité des caspases inflammatoires pouvant déclencher la mort cellulaire pyroptotique et la maturation de cytokines, souvent en coordination avec les voies de l’inflammasome. Son expression et son état d’activation sont étudiés dans des contextes d’infection, d’inflammation stérile et d’activation des cellules myéloïdes, où une signalisation dérégulée des caspases inflammatoires peut influencer les phénotypes de lésions tissulaires. **CASP5** est donc pertinent pour comprendre les mécanismes reliant la signalisation des récepteurs de reconnaissance de motifs, les programmes de mort cellulaire et les réseaux d’expression génique inflammatoire.

caspase-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASP5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

caspase-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASP5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de caspase-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASP5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de caspase-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie caspase-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASP5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.